ساخت وکتور بیانی pcdna۳.۱-fshβ به منظور انتقال ژن زیر واحد fshβ به سلول لاین پستان داران

سابقه و هدف: هورمون محرک فولیکولی (follicle stimulating hormone, fsh)، یکی از هورمون های گلیکوپروتئینی هیپوفیز است که از دو زیر واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیرواحد بتا حاوی 111 اسیدآمینه و یک سیگنال پپتید 18 اسیدآمینه ای و مسئول فعالیت بیولوژیکی هورمون می باشد. هدف از این مطالعه ساخت وکتور بیانی pcdna3.1-fshβ به منظور انتقال ژن زیر واحد fshβ به سلول لاین پستانداران بود. مواد و روش ها: ابتدا یک جفت پرایمر برای ساب کلونینگ زنجیره β از t.vector طراحی گردید تا علاوه بر داشتن نواحی ابتدا و انتهای ژن زنجیره β دارای محل اثر آنزیم های hindιιι و ecorι باشد. زنجیره بتای آمپلیفیه شده از ناحیه جای گاه دو آنزیم فوق در پلاسمید pcdna3.1 کلون و پلاسمید نوترکیب به وسیله ترانسفورماسیون وارد سلول e.coli گردید. کلون های تشکیل شده به وسیله pcr مجدد بررسی و پلاسمید تعدادی از کلون های مثبت تخلیص گردید. صحت پلاسمیدهای خالص شده به دو روش هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید گردید. یافته ها: آنالیز آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که پلاسمید pcdna3.1-f390β دارای ساختار پلاسمیدی و توالی ژنی صحیح است و تطابق کامل با ژن بتای هورمون fsh گزارش شده در genbank دارد.  نتیجه گیری: این پلاسمید نوترکیب به لحاظ ساختاری صحیح و جهت انتقال ژن به سلول کشت پستان داران و ارزیابی بیان مناسب می باشد.